判斷細(xì)胞培養(yǎng)基是否長(zhǎng)菌(即被污染)主要可以通過肉眼觀察和顯微鏡檢查兩種方式。以下是具體的判斷方法:
肉眼觀察
?細(xì)菌污染?:通常在污染后4-6小時(shí),培養(yǎng)基會(huì)變得渾濁。有時(shí)稍加震蕩,便會(huì)有很多混濁物漂起。細(xì)菌污染爆發(fā)非常快,上午染菌,下午或第二天就爆發(fā),培養(yǎng)基會(huì)變渾濁,并且pH發(fā)生很大變化,培養(yǎng)基顏色會(huì)變化很大,一般是變黃?。
?真菌污染?:真菌污染一般爆發(fā)時(shí)間在2-3天。在爆發(fā)時(shí),培養(yǎng)基里會(huì)有肉眼可見的污染物,培養(yǎng)基也開始變渾濁。如果時(shí)霉菌污染,爆發(fā)時(shí),培養(yǎng)基里肉眼可見一坨一坨的白點(diǎn);如果是念珠菌,會(huì)在顯微鏡下看到一串一串的珠子樣的?。
顯微鏡下觀察
?細(xì)菌污染?:在顯微鏡下呈黑色細(xì)沙狀,或背景有大量黑點(diǎn)。受細(xì)菌污染的細(xì)胞形態(tài)可能會(huì)發(fā)生改變(如多角、多核等),胞質(zhì)中產(chǎn)生空泡、細(xì)胞漂浮凋亡?。
?真菌污染?:有些真菌呈類似棉花絮狀的漂浮物。若是念珠菌會(huì)呈卵圓狀,在細(xì)胞周邊生長(zhǎng)。早期并不會(huì)使得培養(yǎng)基變黃變渾濁,但在顯微鏡下可觀察到菌絲體。真菌形成的菌絲呈絲狀,管狀,樹枝狀,串珠狀?。
其他判斷方法
?培養(yǎng)基不渾濁,有絲狀物質(zhì)?:可以初步判斷是真菌污染?。
?培養(yǎng)基不渾濁、沒有絲狀物質(zhì),但是細(xì)胞狀態(tài)變差,生長(zhǎng)變慢?:在顯微鏡下觀察可能會(huì)有小黑點(diǎn),是細(xì)胞凋亡壞死,釋放出大量碎片,看起來就像黑膠蟲,細(xì)胞傳代以后就出現(xiàn)細(xì)胞間黑點(diǎn),細(xì)胞空泡化,很多類似凋亡、壞死的細(xì)胞,最終細(xì)胞漂浮,死亡?。